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博客我们 秋木 游历结构生物学荆棘遍布而又奇妙非凡的世界(三)
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2008.12.01 17:51:10 |
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有了纯化的蛋白质,把溶液浓缩、过滤(除去大的聚集体)后,就可以开始长晶体了。中间关键的是浓缩过程要算计好,要浓缩到足够浓(否则不容易结晶),但有不能过分浓,太浓了蛋白质的分子之间容易互相聚集,也不能够结晶。我一般浓缩到10mg/ml时留出一部分样品,剩下的继续浓缩至最高浓度(比如长晶体的实验需要300ul样品,我就把溶液浓缩到只有320ul),一些溶解度好的蛋白质,能浓缩到高达60~120mg/ml;大多数样品能浓缩到20~30mg/ml。长晶体的实验(set up crystallization exp.)在北美的各个晶体学实验室被俗称为set up tray,因为晶体长在24孔板(悬滴法,hanging drop)或96孔板(坐滴法,sitting drop)上。 当一些人在实验室埋头苦干,期待挖到金矿时,另一些聪明人早把挖矿需要的一切做成了商品,积累了真金白银。实验室如果自己配结晶试剂,都选择原料纯度等级最好的Sigma-Aldrich公司或 Fluka公司的产品,如果试剂不纯的话,很难重复得到晶体;实验室基本都用买来的配好的试剂,这样至少可以保证
在试剂这方面的均一性。美国、加拿大、日本都有出售结晶试剂的公司,我们国家还没有,国内为数不多的几个晶体学实验室都买国外的试剂,花很长的时间才能买回来,还要付高额的关税。不知何时,我们自己才能生产高质量的试剂。有一个另人不解的现象是,国内的人都说发达国家好:道路干净、东西的品质高,但不知为什么我们不把自己的路弄干净,不生产品质高的东西。毛主席曾有个比喻:扫帚不到,灰尘不会自己跑掉。任何事都要经过劳动才有理想的效果,这方面我们出版社做得好,我见做清洁的小王把擦楼道的墩布都洗得干干净净的! 国外供应晶体学实验室的商品种类繁多,比如Hampton Research 公司的各种试剂和各式工具就有上千种。他们收集了98种公开发表的文章上的结晶试剂配方,组成试剂盒,每种10ml;另外又开发出各种pH与各种离子强度的盐配比、高离子强度的盐与低分子量聚合物配比、低离子强度的盐与高分子量聚合物配比……各种条件被细分后再交叉组合到一起,此外还提供各种可以提高蛋白质溶解度(减少聚集),可能影响晶核形成的化学物质。每个试剂盒卖578美元。为了不错过半点机会,我们会用上所有的试剂盒,因为不知哪个条件下晶体真的就出来了。在一个晶体学网站的论坛上,曾经有人说晶体总也不出来,有一天过滤(消毒)了一点儿泡菜汁加进去后,竟然长出来了!这听上去象个笑话,但可以想见长晶体的过程真的很茫然。 晶体学商业比晶体学研究要痛快得多,和其他商业一样,也可以无限地细分市场,可以提供人们他们所需要的一切,同时也可以制造出人们所不需要的一切以满足人无止境的欲望。社会就这样向着墒增大的方向发展变化——这就是我们理想的文明吗? 不过晶体学研究的伟大成果也不简单,有好几位科学家因之得了诺贝尔奖。
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